阪崎肠杆菌快速增菌剂

一、原理及适用范围
       阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii )存在于肠道中，在一定条件下可引起人和动物致病。能引起新生儿脑膜炎、致死性小肠结肠炎和菌血症等疾病，且伴随有严重的神经系统后遗症、发育障碍等症状，引起的死亡率高达50％以上。临床调查证明，新生儿阪崎肠杆菌感染与婴儿配方奶粉密切相关，奶粉中微量的阪崎肠杆菌污染也能导致感染的发生。
       阪崎肠杆菌快速检验套装由阪崎肠杆菌快速增菌剂和阪崎肠杆菌测试片两个产品组成。阪崎肠杆菌快速增菌剂是根据污染阪崎肠杆菌样品——乳品及乳制品而专门设计的快速增菌剂，6 h～8 h即可完成样品中阪崎肠杆菌的快速定向增殖，有效的缩短了检测时间，提高了阪崎肠杆菌的检测准确度。
       阪崎肠杆菌测试片（FilmplateTM Enterobacter sakazakii  BQ208）是一种预先制备好的一次性培养基产品，由阪崎肠杆菌选择性培养基、吸水凝胶和特异性酶显色剂等组成，简化了检测程序，更加适合各级检验部门和食品生产企业使用。本产品适用于奶粉、牛奶及奶制品的快速检测。
       参照标准：食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验（GB 4789.40-2010）。
二、操作方法
1、样品处理：
1.1、固态奶粉样品处理：取一包增菌剂粉，倒入1000mL的三角瓶中，加入900mL纯净水，搅拌均匀，盖塞后加热煮沸，保持20min（有条件可采用115℃灭菌15min）。使用前预热至44℃左右，加入100g奶粉样品，完全溶解后，44℃±0.5℃培养6h即可。
1.2、液态奶样品处理：取一包增菌剂粉，溶于900mL纯净水中，搅拌均匀，每100mL分装于250mL三角瓶中，盖塞后，加热煮沸，保持20min（有条件可采用115℃灭菌15min）。使用前预热至44℃左右，加入100mL液态奶样品，混合均匀后，44℃±0.5℃培养6h即可。
2、接种：取出经过增菌的样品液，混匀后吸取1mL加入到4mL无菌水中，制成五倍稀释液。将阪崎肠杆菌测试片（BQ208）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取五倍稀释液1mL慢慢均匀地滴加到测试片中央滤纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s使培养基凝固，每个样品接种两片。做一片空白阴性对照。
3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15h～24h。
三、结果判读
       对测试片进行观察，呈蓝绿色的菌落为阪崎肠杆菌，为阳性结果；无任何点为阴性结果。出现阳性菌落的样本，最好用其他更为可靠的方法进行验证，没有条件的至少要再取样重复检验一次。
四、结果报告
在100mL（或100g ）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。
五、附加说明
1、使用阪崎肠杆菌快速增菌剂结合阪崎肠杆菌测试片的方法来检验阪崎肠杆菌，仅需要21h～30h即可完成，这种方法快捷、方便，检验准确性与国标方法（GB 4789.40-2010）相比，无显著性差异。
2、快速增菌剂仅适于乳品及乳制品的增菌作用，配成增菌液加入样品前请务必预热至44℃左右使用。
3、操作方法2.2中将样品增菌液推荐稀释5倍后进行检测，具体可根据样品污染程度酌情考虑。
4、如采用煮沸灭菌法，请当天使用，采用高压灭菌方法请在一周内使用。
5、注意使用过的增菌液中和测试片上可能带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。